细菌电转实验
2019.09.29
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一、实验准备
1.仪器准备:电转仪器、离心机、恒温摇床、恒温培养箱。
2.耗材试剂准备:电转杯、电转液、枪头、带抗性LB平板、SOC培养基、1.5mL EP管、锥形瓶、待电转质粒。


二、实验流程
1.大肠杆菌(DH5a)接菌(1:100)到5mL 无抗LB培养基/SOC培养基,摇菌6-8h,直至对数期生长。(OD600:0.7-1.0)
2.用6600 rpm/min x 5min收集活菌沉淀。
3.CellEasy电转液重悬,洗两遍。6600 rpm/min x 2min。用1mL电转液重悬细菌,可分装10管,0.1mL/管,备用。
4.1ug质粒和0.1mL菌液混匀。电转质粒浓度最好10ug/mL以上。
5.移取85ul混合液与1mm电转管中,按细菌电转实验参数进行设置(细菌电转:800-1200V,5ms)
6.电转完毕后,取出电转杯,加入2mL 预冷SOC培养,缓慢重悬,移至
  新的1.5mL EP管中。
7.37度恒温摇床,200rpm/min,培养30-45min。
8.取适量菌液涂板。(可选:瞬离后,移取部分培养基,重悬100-200uL体积重悬菌液,涂布于带有质粒相应抗性的LB平板中)
9.37度恒温培养箱静止培养过夜。(12-16小时)

细菌电转实验.pdf


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